SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
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商品資訊
SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒（货号:RTD6116）
● 产品组成：
货号
名称
规格
保存条件
AC2914-01
40%PAA(29:1)
100 ml
4℃
TS050-01
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8
100 ml
4℃
TS030-01
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8
50 ml
4℃
AP020P
APS（干粉）
0.5 g
RT
TA0761-01
TEMED
0.5ml
4℃，避光
PL080-01
5×MonoColor蛋白上样缓冲液（含还原剂）
1 ml
-20℃
TG120P
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）
1 L
RT
说明书
一份
● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE蛋白电泳试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。本试剂盒可配制至少50块常规大小的PAGE胶。
● 使用说明：
一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%
50-150kD
8%
30-90kD
10%
20-80kD
12%
12-60kD
15%
10-40kD
配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10%APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．按照表二将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
3
6
9
12
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25
2.5
3.75
5
40％ PAA（29:1）
0.75
1.5
2.25
3
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
2.7
5.4
8.1
10.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25
2.5
3.75
5
40％ PAA（29:1）
1
2
3
4
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
10％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
2.45
4.9
7.35
9.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25
2.5
3.75
5
40％ PAA（29:1）
1.25
2.5
3.75
5
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
12％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
2.2
4.4
6.6
8.8
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25
2.5
3.75
5
40％ PAA（29:1）
1.5
3
4.5
6
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
15％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
1.825
3.65
5.475
7.3
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25
2.5
3.75
5
40％ PAA（29:1）
1.875
3.75
5.625
7.
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
2 ml
4 ml
5 ml
10 ml
H2O
1.3
2.6
3.25
6.5
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8
0.5
1
1.25
2.5
40％ PAA（29:1）
0.2
0.4
0.5
1
TEMED
0.002
0.004
0.005
0.01
10％ APS
0.02
0.04
0.05
0.1
三 电泳：
凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。
5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
下一步实验。
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