SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
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商品資訊
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
货号
名称
规格
RTD6123
SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
50次
● 产品组成：
货号
名称
规格
保存条件
AC2913-01
30%PAA(29:1)
100 ml
4℃
TS0588-01
1M Tris-HCl pH8.8
100 ml
RT
TS0568-15ml
1M Tris-HCl pH6.8
15 ml
RT
SD050-5ml
10% SDS
5 ml
RT
AP020P
10% APS（干粉）
5 ml
RT 配制后-20℃贮存
TA0761-01
TEMED
0.5 ml
4℃，避光
说明书
一份
● 产品简介：
本公司提供的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒包含凝胶制备所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒不仅可用于配制SDS-PAGE凝胶，也可用于配制非变性(Native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制至少30-50块常规大小的PAGE胶。
● 贮存、运输及效期：
按照标签温度贮存；常温运输；有效期一年。
● 使用说明：
一 配制分离胶：
根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一）。
表一 不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
SDS-PAGE分离胶浓度
最佳分离范围
6%
50-350kD
8%
35-300kD
10%
20-150kD
12%
15-100kD
15%
10-80kD
配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS：
10% APS配制-5 ml：将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。
制备分离胶步骤：
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．根据表二，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表二 SDS-PAGE分离胶配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
6％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
2.05
4.1
6.15
8.2
1M Tris-HCl pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
30％ PAA（29:1）
1
2
3
4
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
8％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
1.7
3.3
5
6.7
1M Tris-HCl pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
30％ PAA（29:1）
1.3
2.7
4
5.3
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
10％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
1.3
2.7
4
5.3
1M Tris-HCl pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
30％ PAA（29:1）
1.7
3.3
5
6.7
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
TEMED
0.005
0.01
0.015
0.02
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
12％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
1
2
3
4
1M Tris-HCl pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
30％ PAA（29:1）
2
4
6
8
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
TEMED
0.003
0.006
0.009
0.012
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
15％ 胶 5ml 10ml 15ml 20ml
H2O
0.5
1
1.5
2
1M Tris-HCl pH8.8
1.9
3.8
5.7
7.6
30％ PAA（29:1）
2.5
5
7.5
10
10% SDS
0.05
0.1
0.15
0.2
TEMED
0.003
0.006
0.009
0.012
10％ APS
0.05
0.1
0.15
0.2
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10% SDS即可配制成非变性PAGE胶。
二 浓缩胶制备：
1．去除覆盖在分离胶上的水层。
2．按照表三将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表三 SDS-PAGE浓缩胶(5%)配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量（ml）
2 ml
4 ml
6 ml
10 ml
H2O
1.4
2.7
4.1
6.8
1M Tris-HCl pH6.8
0.25
0.5
0.75
1.25
30％ PAA（29:1）
0.33
0.67
1
1.7
10% SDS
0.02
0.04
0.06
0.1
TEMED
0.002
0.004
0.006
0.01
10％ APS
0.02
0.04
0.06
0.1
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