超低分子量蛋白Marker III（3.4-100kd）（非预染）
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商品資訊
超低分子量蛋白质Marker III（3.4-100kD）
Ultra Low Molecular Weight Protein Marker III
●产品编号及规格：
RTD6125 10T（50μl） 300元
● 储存条件：
-20℃保存，开封后有效期12个月。
● 产品简介：
本产品包含5种多肽和3种低分子量蛋白质组成，分子量范围为3.4kD-100kD。可以用来判断 SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。
● 使用说明：
第一次收到该产品，室温融化后，彻底混匀，离心快甩将溶液完全收集到管底，根据需要适量分装成小管，-20℃贮存，每次取一小管使用；本产品为即用型，融化后既能使用，不能95℃加热处理。
一. 制胶：
I 配制分离胶
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（19:1）、凝胶缓冲液和乙二醇加入到小烧杯中混合。
2．加入10%APS和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
4．静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
表一 （一块0.75mm mini胶用量）
分离胶
浓缩胶
18％T, 5%C /6.0 ml
5％T, 3.3%C/2 ml
40% PAA（19:1）
2.7 ml
/
40% PAA (29:1)
/
0.25 ml
4×凝胶缓冲液
1.5 ml
0.5 ml
乙二醇（电泳级）
1.8 ml
/
ddH2O
/
1.25 ml
10％APS
50-65 μl
20 μl
TEMED
6 μl
2 μl
注：如非必须，不要使用1.0mm和1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1．按照表一将不同体积的双蒸水、40%PAA（29:1）和凝胶缓冲液加入到小烧杯中混合。
2．加入10%过硫酸铵和TEMED，立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
3．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
4．静置30-60分钟装待凝胶聚合
二. 电泳：
1. 取一管分装好的Marker样品，彻底融化，不要加热处理，充分混匀后备用。
2. 电泳前，将10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液（Cat No：CB010）用蒸馏水稀释成1×缓冲液备用。将电泳槽的内外槽加入1×缓冲液，轻柔拔出梳子，将Marker或蛋白样品（样品已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理）加入点样孔，根据表二条件进行电泳，至蓝色指示前沿至分离胶3/4位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2-3个小时。注：如果电泳时间过短，染色时，指示前沿容易遮挡小于5kd的小肽。
表二 多肽电泳条件
恒电压
150 V
起始电流
45-55 mA
结束电流
10-15 mA
电泳时间
2-3小时
三. 染色
根据常规实验步骤，用配方5和6（表三）进行染色和观察。如果使用配方5进行染色时效果不好或考虑其毒性，请选择本公司的FastBlue蛋白染色液（Cat No：RTD6202），该产品能在5分钟之内完成蛋白的染色，不至于小肽在染色和脱色中从凝胶中脱离，是常规染色液的理想替代品。
表三 小分子蛋白质SDS-PAGE电泳试剂配制
1. 40%PAA（29:1）（配制浓缩胶）
丙稀酰胺 38.67g
甲叉双丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。
贮存：4℃
2. 40% PAA（19:1） （配制分离胶）
丙稀酰胺 38 g
甲叉双丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解后定容至100 ml，过滤后使用。
贮存：4℃
3. 4×凝胶缓冲液（配制凝胶用）
[3MTris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris碱 36.3 g；ddH2O 80ml
0.4 g SDS或4 ml 10％ SDS
用HCl调pH值至8.45；用ddH2O定容至100 ml
贮存：4℃4. 10×Tris-Tricine-SDS电泳缓冲液
[1MTris;1MTricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris碱 121.14g
Tricine 179.2g
SDS10g
用ddH2O溶解，定容至1000ml(不用调pH)。
贮存：4℃
注：使用前稀释成1×缓冲液使用
5. 染色液
冰醋酸 100 ml
甲醇 450 ml
考马斯亮蓝G-250 0.25 g
水 450 ml
6. 脱色液
冰醋酸 100ml
水 900ml
7. 2×Tricine蛋白样品上样缓冲液（10ml）
1ml 1MTris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.8g SDS
0.31g DTT（或者400μl β-巯基乙醇）
2mg 考马斯亮蓝G-250
用灭菌ddH2O定容至10ml
混匀分装-20℃贮存备用
多肽电泳配套试剂
名称
货号
规格
RTD6120
10次
RTD6101
10次（100 μl）
RTD6125
10次（50 μl）
RTD6110
10次 （50 μl）
RTD6145-01
10次 （50 μl）
AC1914-01
100ml
AC2914-01
100ml
GB010-100ml
100ml
TP050
10×1ml
RTD6202
500ml
EA0582-02
100 ml
CB010P
500 ml
AB080
250 ml
CB010
100 ml
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