非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号:RTD6130）

Native PAGE Gel Preparation and Electrophoresis Kit

● 产品组成：

货号	名称	规格	保存条件
AC2913-01	30%PAA(29:1)	100 ml	4℃
RTD6130-02	4×分离胶缓冲液 pH8.8	100 ml	4℃
RTD6130-03	4×浓缩胶缓冲液 pH6.8	50 ml	4℃
AP020P	APS（干粉）	0.5 g	RT
TA0761-01	TEMED	0.5 ml	4℃，避光
PL111	5×非变性非还原蛋白上样缓冲液	1 ml	-20℃
TG130P	5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（干粉）	1L	RT

● 产品简介：

本公司提供的非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水。本试剂盒可用于配制非变性(native)PAGE凝胶。本试剂盒可配制30-50块常规大小的非变性PAGE胶。

特别说明：由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统，分离胶pH为8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤7.0，这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞7.0，请选择碱性电泳凝胶系统分离（货号RTD6131）。

● 使用说明：

一 配制分离胶（各试剂使用量请参考表二）

根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度（表一），再按照下面的分离胶配方表（表二）配制非变性PAGE的分离胶(即下层胶)。

表一 不同浓度的PAGE分离胶的最佳分离范围：

SDS-PAGE分离胶浓度	最佳分离范围
6%	50-150kD
8%	30-90kD
10%	20-80kD
12%	12-60kD
15%	10-40kD

10% APS配制-5 ml：

将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

制备分离胶步骤：

1．根据下表，将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡

2．在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。

3．静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

 

 

1．去除覆盖在分离胶上的水层。

2．按照表一将不同成分在一个小烧杯或试管中混合；先后加入TEMED和10%过硫酸铵，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。

3．将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。

4．将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。

5．静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。

注：凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。

三 电泳：

凝胶凝固好后，根据以下配方准备电泳缓冲液。

5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（不含SDS）的配制-1 L：将一包5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。

 

实验示例