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非变性蛋白电泳Marker转膜问题

http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248

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高分子量非变性电泳蛋白质Marker II（45-669 kD）

High Molecular Weight Native Electrophoresis Protein Marker II

 

● 产品编号及规格：

RTD6142   20次（100 μl）

● 储存及运输条件：

    -20℃贮存；常温运输，开封后有效期为12个月。

● 产品简介：

    本产品是5种蛋白质混合物，分子量范围为45-669kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到分布均匀密度相近的5条带：

蛋白名称	分子量(kD)	说明	pI
Thyroglobulin	669	球蛋白	4
Ferritin	440	脱铁后铁蛋白单体	5.3-5.8
Recombinant protein	228	昆虫球蛋白，单体分子量57 kD，非变性下为四聚体	4.9-6.3
BSA	66	球蛋白，单体分子量66 kD，非变性下可形成少量二聚体	4.6-5.8
Ovalbumin	45	球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge isomer）	4.71或4.59

● 使用说明：

1. 常温融化后，彻底混匀，上样电泳。

注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，0.75mm×5mm（厚度×宽度）的加样孔上样5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。

2. 电泳结束后，染色，观察结果。

注：使用银染时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，可以适当降低Marker上样量，一般稀释50倍。

注意：

1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。

2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。

● 实验示例：

 8% Laemmli Native Gel（Cat:RTD6130） 
         1×TG 稳压150V 35-9 mA 85 min
lane 1，2  RTD6142 非变性蛋白Marker 5 μl
lane 3 BSA 2 μg
lane 4 Ovalbumin 2 μg