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非变性蛋白电泳Marker转膜问题

http://www.real-times.com.cn/news_detail.aspx?NewsID=248

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宽分子量非变性电泳蛋白质Marker（21-880 kD）

Broad MW Native Electrophoresis Protein Marker（21-880 kD）

●产品编号及规格：

RTD6144   20次 100 μl

●储存及运输条件：

-20℃保存，湿冰运输，有效期为12个月。

● 产品简介：

    本产品有5种蛋白组成，分子量范围为21-880 kD，经过非变性电泳后，用考马斯亮蓝染色后可以得到5条主带。

蛋白名称	分子量(kD)	蛋白来源	pI	说明
Ferritin	440 880	equine spleen	N/A	非变性下440kD和880 kD
Carbonic Anhydrase	300	Bovine Erythrocytes	6.4	单体分子量29kD，非变性下为10聚体，低于300kD有电荷异构体（charge isomer）
Lactic Dehydrogenase	165	Microorganism	4.5	球蛋白，单体分子量36 kD，非变性下可形成四聚体
Ovalbumin	45	egg white	4.71或4.59	球蛋白，分子量为45kD，非变性条件下大于45kD会出现电荷异构体（charge isomer）
Trypsin Inhibitor	21	Soybean	4.5	非变性下21 kD

● 使用说明：

1. 取出产品后，常温融化后，彻底混匀，上样电泳。

注：上样量根据胶的厚度和梳子的宽度确定。一般说来，1.0厚度10齿梳子加样孔上样5 μl，1.0厚度15齿梳子加样孔上样量2.5 μl，其他规格梳子请适当调整上样量。

2. 该产品不含蛋白凝胶制备试剂，您可以选择非变性PAGE凝胶制备及电泳试剂盒（货号：RTD6130）或者蛋白预制胶（货号RTD6118）。如自备试剂，经典Laemmli系统中把制胶溶液、电泳缓冲液和上样缓冲液中的SDS和还原剂（DTT或β-巯基乙醇）全部去除即可进行非变性电泳。

3. 电泳条件：

建议使用10%非变性胶或者4-20%梯度非变性胶（货号：RTD6118-0420）进行电泳。

恒电压	120 V
起始电流	27-35 mA/板胶
结束电流	7-10 mA/板胶
电泳时间	1h20min+

4. 电泳结束后，考马斯亮蓝染色，观察结果。

注：使用银染染色时，由于灵敏度高于考马斯亮蓝染色方法，需要适当降低Marker上样量，一般稀释50倍后上样。

注意：

1. 本蛋白Marker不适用于变性蛋白电泳（SDS-PAGE），因为在SDS存在下，含有多个亚单位的蛋白会不同程度解聚。

2. 在非变性条件下，蛋白的迁移与蛋白的电荷、蛋白形状以及蛋白分子量都有关。因此，在一种凝胶浓度下使用本Marker不能精确估计出目的蛋白的分子量。非变性电泳中，蛋白分子量的确定应该是在不同凝胶浓度下，确定出蛋白的Rf值，绘制出凝胶浓度对Rf的曲线从而判定蛋白的分子量。

● 实验示例：

1 4-20% Tris-甘氨酸 非变性胶电泳：

    4-20% RealPAGE Precast Gel
1×TG 200V 50-19mA  47min

2. 4-16% Blue Native：

3： 4-15% Tris-甘氨酸非变性：