Western无蛋白快速封闭液

Protein Free Rapid Blocking Buffer for WB

● 产品组成：

货号	名称	规格	保存条件
PF1070-100ml	Western无蛋白快速封闭液	100 ml	2-8℃
PF1070-500ml	Western无蛋白快速封闭液	500 ml	2-8℃
	说明书	一份

● 产品简介：

本产品专为快速高效封闭Western Blot 转印膜而设计，采用无蛋白配方，避免抗体与封闭剂的非特异结合，最大程度地降低了背景。同时，本封闭剂无内源的磷酸化蛋白及生物素，对磷酸化特异抗体及生物素检测也不会产生干扰。本封闭剂不与蛋白产生非特异性结合，因而只封闭膜而不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点，大大提高了抗体检测灵敏度。实验表明，本封闭剂对许多抗体都有不同程度的信号增强作用。然而这种信号增强作用因抗体而异，对某一特定抗体，并不一定具有确定的信号增强作用。

注意： 没有任何一种封闭剂能适合所有抗原和抗体的检测系统。如出现本试剂不适合的抗体，请替换使用其它种类的封闭剂如BSA或脱脂奶粉等。

● 贮存：

  2-8℃贮存，有效期一年。

● 注意事项：

1. 快速高效：10-60 min内完成封闭；只结合封闭转印膜而不结合蛋白，因此不会屏蔽样品蛋白的抗体识别位点，与传统的脱脂奶粉和BSA 封闭相比信噪比更高；

2. 方便快捷：无需稀释，即取即用；

3. 性能可靠：无蛋白配方，与抗体无交叉反应；

4. 应用范围广：无磷酸化蛋白，无生物素，尤其适合磷酸化特异抗体及生物素检测系统；

5. 节省抗体：使用本封闭剂后，所需的最适抗体浓度低于常规使用浓度，可大大节省抗体使用量。

6. 与PVDF膜相比，NC膜需要更长时间的封闭。

● 使用说明：

1. 本产品无需稀释，开盖即用。

2. 完成转膜后，使用TBST漂洗转印膜3次，每次5分钟；

 

3. 将转印膜放入到杂交孵育盒中，加入10-20 ml 无蛋白快速封闭液完全覆盖转印膜，置于摇床轻轻摇动，参考下表确定封闭时间：

膜类型	推荐封闭时间	反应温度
PVDF膜	10-20分钟	常温 25度
NC膜	40-60 分钟	常温25度

注意：使用本产品，PVDF膜和NC膜使用推荐封闭时间，经多种抗体的测试封闭效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试延长封闭时间。如有特殊需要，也可4℃封闭过夜。

4.  封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。

 

● 实验示例：

 

Jurkat细胞总蛋白GAPDH检测

电泳条件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

转膜条件：NC膜，1×RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020)

恒流400 mA 35 min 65-59 V

封闭：无蛋白封闭液（Cat：PF1070） RT 60 min

一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 过夜4℃孵育

二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000  RT 60min

ECL发光：RealECL发光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光

 

 

植物叶绿体LHCa3检测

Electrophoresis: 10% RealPAGE SDS Electrophorosis(RTD6148)

Transfer: 1×RealBlot transfer buffer(Cat:RT5020)

               350 mA blotting to NC membrane for 30 min.

Blocking: 无蛋白封闭液（Cat:PF1070） RT  for 20 min;

BSA at RT for 1 h.

Primary antibody: Lhca3（Cat:RGL2080） 1:2000 dilution at RT for 1h

Secondary antibody: 1:5000 dilution using Goat Anti-Rabbit IgG AP(Cat:AGR1030)

                Detection: using BCIP/NBT(Cat:BN1026) at RT for 5 min