非变性凝胶蛋白电泳试剂盒（含预制胶）

 

Native PAGE Gel Protein Electrophoresis Kit

货号	名称	规格
RTD6135	非变性凝胶蛋白电泳试剂盒	10次

● 产品组成：

货号	名称	规格	贮存
RTD6117-0415	RealPAGE Tris-Gly预制胶4-15%	10板	4℃
PL111	5×非变性非还原蛋白上样缓冲液	1 ml	-20℃
TG130P	5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（粉末型）	1 L	RT
RTD6202-02	FastBlue蛋白染色液	500 ml	RT

● 运输和贮存：

本产品常温运输；组份按照标签温度贮存；有效期一年。

● 产品简介：

本公司提供的非变性凝胶蛋白电泳试剂盒包含非变性电泳所需的全部试剂，用户只需自备蛋白电泳设备。试剂盒配套有预制胶，不需要自己制备凝胶，方便使用。另外，试剂盒提供蛋白上样缓冲液，电泳缓冲液以及染色液，可以方便完成蛋白样品从上样到最后染色的全部过程。

试剂盒配套的预制胶为梯度凝胶，浓度为4-15%，可以有效分离30-1000 kD蛋白。

本试剂盒可以进行10次非变性电泳。配套的预制胶厚度为1.1 mm，12齿，每个泳道可以上样最大30 μl样品。

特别说明：由于本系统采用非连续Laemmli凝胶系统（Tris-Glycine系统），电泳凝胶系统pH在8.3-8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI≤8.0（酸性蛋白），这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，pI越低于8.0，带更多的负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。如果待分离的蛋白等电点pI＞8.0（碱性蛋白），请选择碱性电泳凝胶系统分离（货号RTD6131）。

● 使用说明：

1. 样品制备：

   该试剂盒不含样品制备的相关试剂，请根据参考文献自行制备非变性蛋白样品。

注：非变性样品制备中注意不用使用任何变性剂如SDS，LDS以及还原型如DTT，BME，TCEP等，以防止蛋白变性。非变性样品的电泳对盐离子浓度高度敏感，样品电泳时尽量把盐离子浓度控制在100 mM以内，过高的盐离子浓度导致电泳拖尾，条带不能有效分离。

2. 电泳：

2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。

注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（下图）。

 

六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。

不兼容Thermol系列电泳槽。

 

2.2 准备电泳缓冲液：

将5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液（粉末型）溶于1 L超纯水中，彻底溶解，测定pH应为8.3-8.5左右，不要调节pH。用前稀释5倍即配成1×即用型Tris-甘氨酸电泳缓冲液。

2.3准备上样样品：

总体积	10 μl
蛋白样品	x μl
5×非变性非还原蛋白上样缓冲液	2 μl
超纯水	补至10 μl
	不要加热

2.4电泳过程；

在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次；随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液。上样，电泳。

Native-PAGE电泳
恒电压	起始电流	结束电流	电泳时间
150V	/板胶	/板胶	min
注：冰浴电泳（可选）

3. 染色：

3.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），摇床常温摇动，条带5-10分钟即可见（蛋白含量高于1 μg条带）。

3.2 摇床常温继续摇动15-30分钟至条带清晰可见。

3.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。

3.4 观察保存结果。

4. 转膜：

5. 实验示例:

RTD6117-0415 4-15% RealPAGE Precast Gel

150V 35-11mA 67min

1×Tris-甘氨酸电泳缓冲液

FastBlue蛋白快速染色染色15分钟