16.5% RealPAGE Tricine预制胶（通用型 U型玻璃板）

Ver.750167

货号	名称	规格
RTD6115-0016	16.5% RealPAGE Tricine预制胶 通用型 U型玻璃板	10板/盒

● 产品简介：

RealPAGE Tricine预制胶可以用来检测2.5-40 kD的多肽大小。预制胶玻璃板尺寸10×8.2 cm，凝胶尺寸8.2×7.2 cm，凝胶厚度1.1 mm，梳子12齿，最大上样体积30 μl，兼容伯乐电泳槽。

● 贮存、运输和效期：

4-8度贮存（切勿冷冻）；常温运输；有效期1个月。

● 使用说明：

一. 电泳缓冲液配制：

10×Tris-Tricine-SDS缓冲液（10×TTS）配制：

将10×Tris-Tricine-SDS缓冲液粉末（Cat No：CB010P）置于一干净的一升烧杯中，加入500 ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500 ml 10×TTS缓冲液。

1×TTS缓冲液配制

	1×TTS配制量 500 ml	1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS	50 ml	100 ml
超纯水	450 ml	900 ml

注：10×Tris-Tricine-SDS缓冲液配方[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; ~pH 8.3]：

Tris碱121.14g；Tricine 179.2g；SDS 10 g，用蒸馏水溶解，定容至1000 ml(不用调pH)，4-8℃贮存，使用前稀释成1×缓冲液使用。

二. 样品处理（变性还原样品）：

      待上样的检测样品与2×Tricine多肽上样缓冲液[Cat:TP050]等体积混合，95℃处理5分钟后上样。蛋白Marker一般已经含有上样缓冲液，根据说明书上样（预染Marker不能加热处理，非预染Marker上样前一般要95℃处理5分钟）。

三. 电泳：

3.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。

 

注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（左图）。六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。不兼容Thermol系列电泳槽。

 

3.2 将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品（已经过处理）加入点样孔，稳压电泳（表1），至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要150 min。

表1 多肽电泳条件

	电压	电流变化	电泳时间
浓缩胶	恒压80 V	起始电流：30-35 mA 终止电流：25-30 mA	~20 min
		注：等待样品指示前沿到达分离胶上沿时，调高电压
分离胶	恒压120 V	起始电流：40-45 mA 终止电流：15-20 mA	~130 min
		注：恒压条件下，电流不可调节，电流是逐渐降低的，观察记录电流数值。

四. 染色：（使用FastBlue蛋白染色液 Cat:RTD6202）

4. 1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），蛋白条带含量高于1μg的，染色1-2分钟即可见。

4.2 摇床上常温摇动10-15分钟，至条带清晰可见满足实验要求后停止染色。

4.3 蒸馏水漂洗凝胶，在蒸馏水中脱色摇动10-15分钟，至凝胶基本无蓝色背景，拍照记录结果。

五. 转膜：

多肽转膜选择孔径0.22 μm PVDF膜（用前用甲醇处理润湿）或0.22 μm NC膜。

5.1 半干转：

使用伯乐Trans-Blot Turbo半干转机器请选择配套的5×RealBlot快速半干转转膜缓冲液（货号：RT5030）。转膜推荐条件：一板小型凝胶（8×10 cm）恒流，1.3 A，7-10 min。

5.2 湿转：

湿转转膜缓冲液：25 mM Tris,192 mM Glycine, 20% Methanol,pH~8.3；

转膜条件：恒流200-300 mA  40-60 min

实验示例：