尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
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商品資訊
尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备及电泳试剂盒
货号
名称
规格
RTD6163
尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒
50次
● 产品组成：
货号
名称
规格
贮存
AC2914-02
40%PAA(29:1)
100 ml
4℃
TS050-01
4×Tris/SDS分离胶缓冲液 pH8.8
100 ml
4℃
TS030-01
4×Tris/SDS浓缩胶缓冲液 pH6.8
50 ml
4℃
RU5080
尿素（电泳级）
220 克
RT
AP020P
APS（干粉）
0.5 g
RT
TA0761-01
TEMED
0.5ml
4℃，避光
PL080-01
5×MonoColor蛋白上样缓冲液(变性,还原)
1 ml
-20℃
TG120P
5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(变性电泳,粉末型)
1 L
RT
说明书
一份
● 贮存、效期及运输：
按照标签温度贮存；有效期一年；常温运输。
● 产品简介：
本公司提供的尿素-SDS-PAGE凝胶快速制备试剂盒包含凝胶制备以及蛋白电泳所需的全部试剂。在SDS-PAGE中尿素作为辅助的变性剂，能与SDS一起彻底变性蛋白，特别是一些跨膜多次的蛋白，尿素辅助SDS可以彻底打开蛋白的高级结构。该产品可以用于Blue Native电泳分离后的二向电泳，也可以用于一些碱性蛋白如组蛋白，鱼精蛋白的变性电泳分离。
本试剂盒可配制至少50块常规大小（8×10 cm）1mm厚度的PAGE胶。
● 使用说明：
一. 配制分离胶（各试剂使用量请参考表1）
1.1 配制分离胶前，根据以下配方准备10% APS溶液-5 ml：
将0.5 gAPS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少常温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10%APS。
1.2按照表1将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合；加入10%APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
1.3 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
1.4 静置30-60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
表1 SDS-PAGE分离胶配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量
6％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素
1.8 g
3.6 g
5.4 g
7.2 g
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
40％ PAA（29:1）
0.75 ml
1.5 ml
2.25 ml
3 ml
H2O
定容至5ml
定容至10 ml
定容至15 ml
定容至20 ml
TEMED
0.005 ml
0.01 ml
0.015 ml
0.02 ml
10％ APS
0.05 ml
0.1 ml
0.15 ml
0.2 ml
8％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素
1.8 g
3.6 g
5.4 g
7.2 g
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
40％ PAA（29:1）
1 ml
2 ml
3 ml
4 ml
H2O
定容至5ml
定容至10 ml
定容至15 ml
定容至20 ml
TEMED
0.005 ml
0.01 ml
0.015 ml
0.02 ml
10％ APS
0.05 ml
0.1 ml
0.15 ml
0.2 ml
10％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素
1.8 g
3.6 g
5.4 g
7.2 g
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
40％ PAA（29:1）
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
H2O
定容至5ml
定容至10 ml
定容至15 ml
定容至20 ml
TEMED
0.005 ml
0.01 ml
0.015 ml
0.02 ml
10％ APS
0.05 ml
0.1 ml
0.15 ml
0.2 ml
12％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素
1.8 g
3.6 g
5.4 g
7.2 g
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
40％ PAA（29:1）
1.5 ml
3 ml
4.5 ml
6 ml
H2O
定容至5ml
定容至10 ml
定容至15 ml
定容至20 ml
TEMED
0.005 ml
0.01 ml
0.015 ml
0.02 ml
10％ APS
0.05 ml
0.1 ml
0.15 ml
0.2 ml
15％ 胶 5 ml 10 ml 15 ml 20 ml
尿素
1.8 g
3.6 g
5.4 g
7.2 g
4×Tris/SDS分离胶buffer pH8.8
1.25 ml
2.5 ml
3.75 ml
5 ml
40％ PAA（29:1）
1.875 ml
3.75 ml
5.625 ml
7.5 ml
H2O
定容至5ml
定容至10 ml
定容至15 ml
定容至20 ml
TEMED
0.005 ml
0.01 ml
0.015 ml
0.02 ml
10％ APS
0.05 ml
0.1 ml
0.15 ml
0.2 ml
二. 浓缩胶制备：
2.1 去除覆盖在分离胶上的水层。
2.2 按照表2将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合；加入10%过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
2.3 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
2.4 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
2.5 静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表2 SDS-PAGE浓缩胶(4%)配方表
组份
不同凝胶体积对应各组份的取样量
2 ml
4 ml
5 ml
10 ml
尿素
0.72 g
1.44 g
1.8 g
3.6 g
4×Tris/SDS浓缩胶buffer pH6.8
0.5 ml
1 ml
1.25 ml
2.5 ml
40％ PAA（29:1）
0.2 ml
0.4 ml
0.5 ml
1 ml
H2O
定容至2 ml
定容至4 ml
定容至5 ml
定容至10 ml
TEMED
0.002 ml
0.004 ml
0.005 ml
0.01 ml
10％ APS
0.02 ml
0.04 ml
0.05 ml
0.1 ml
三. 电泳：
3.1 5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液的配制-1 L：
将一包5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液干粉全部倒入1L烧杯中，加入约900 ml水彻底溶解，用水定容至1 L，即配成5×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液（此溶液不用调节pH值）。用前再稀释5倍即配成1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。
3.2 电泳：
在电泳槽的内槽内加入1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，随后在电泳槽外槽加入适量的1×Tris-甘氨酸-SDS电泳缓冲液。上样，电泳，一般是浓缩胶80V，分离胶120V恒压，等指示前沿溴酚兰电泳到分离胶下缘后，结束电泳，染色或者进行下一步实验。
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